ELISA中非特异性显色原因分析
【摘要】:影响ELISA中非特异性显色的原因很多,如试剂盒特异性、检验标本中含酶标记物的干扰物,操作过程中的问题。本文就这一原因作一简要分析,以便可以通过以上措施把非特异显色降至**限度,从而提高检测的特异性,并得到更准确、可靠的实验结果。【关键词】 ELISA 非特异性 显色
酶联免疫吸附试验(ELISA)自1971年自问世以来,以其敏感性高,特异性强,操作简便、安全,而广泛应用于临床诊断,开创了免疫学诊断的新纪元。但同其它免疫诊断方法一样酶免试剂在它的研究、生产及使用中常常会碰到非特异性问题,本文就在实验过程中产生的一些原因及如何采取一些措施,消除非特异性显色作一分析。
1、试剂盒特异性因素
1、1 固相载体的选择。ELISA中常用的固相载体有微量滴定板、小珠和小试管三种,以微量滴定板**为常见[1]。它具有良好的吸附性能,孔底透明度高,空白值低,各板之间、同一板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工艺的差别,各产品的质量差异很大。因此,在选择试剂盒同时要对其使用的微孔板型号进行认证,评估。
1、2包被物的纯度。在酶联免疫测定尤其是间接ELISA中,试剂的特异性取决于使用抗原的纯度。目前由于技术条件的限制,包被用抗原或抗体的纯度不可能达到100%,所以有些非特异性显色不可避免,只能尽可能提高纯度,提高特异性。目前使用的包被抗原一般为合成多肽抗原。
1、3包被抗体的效价。具有高亲和力和高特异性的包被抗体,是决定试剂特异性的重要方面。
1、4 封闭。是ELISA中重要的一步,目的是封闭固相载体表面尚未被所占据的空隙[2],减少后续步骤中非特异性蛋白的干扰。
2、检验标本中含有酶标记物的干扰物
2、1内源性干扰物:类风湿因子(RF)、黄疸等,类风湿因子是可作用于多种动物以及人IgGFc段的自身抗体,多数为IgM类,能充当抗原成分与固相及酶标抗体反应,从而呈现非特异性显色。