（二）双位点一步法
在双抗体夹心法测定抗原时，如应用针对抗原分子上两个不同抗原决定簇的单抗体分别作为固相抗体和酶标抗体，则在测定时可使标本的加入和酶标抗体的加入两步并作一步（图15-5）。这种双位点一步不但简化了操作，缩短了反应时间，如应用高亲和力的单抗体，测定的敏感性和特异性也显著提高。单抗体的应用使测定抗原的ELISA提高到新水平。
在一步法测定中，应注意钩状效应（hookeffect），类同于沉淀反应中抗原过剩的后带现象。当标本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，所得结果将低于实际含量。钩状效应严重时甚至可出现假阴性结果。
（三）间接法测抗体
间接法是检测抗体**常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。操作步骤如下：
（1）将特异性抗原与固相载体连接，形成固相抗原：洗涤除去未结合的抗原及杂质。
（2）加稀释的受检血清：其中的特异抗体与抗原结合，形成固相抗原抗体复合物。经洗涤后，固相载体上只留下特异性抗体。其他免疫球蛋白及血清中的杂质由于不能与固相抗原结合，在洗涤过程中被洗去。
（3）加酶标抗抗体：与固相复合物中的抗体结合，从而使该抗体间接地标记上酶。洗涤后，固相载体上的酶量就代表特异性抗体的量。例如欲测人对某种疾病的抗体，可用酶标羊抗人IgG抗体。
（4）加底物显色：颜色深度代表标本中受检抗体的量。
本法只要更换不同的固相抗原，可以用一种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体。
人抵抗素(RETN)酶**测试剂盒(ELISA试剂盒) Homo sapiens (Human) Resistin (RETN)ELISA KIT
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操作注意事项
许多医院在使用酶标仪之前是通过目测判断结果，操作过程随意性较大，在使用酶标仪后操作必须规范。
A. 使用移液器加液，移液枪头不能混用。
B. 洗板要干净，避免交叉污染。
C. 严格按照试剂盒的说明书操作，反应时间准确。
D. 请勿将样品或试剂洒到仪器表面或内部，操作完成注意做好清洁工作。
E. 不要在测量过程中关闭电源。
F. 对于因试剂盒问题造成的测量结果的偏差，应根据实际情况及时修改参数，以达到**效果。
G. 使用后盖好防尘罩。
H. 出现技术故障时应及时与厂家联系，切勿擅自拆卸酶标仪。
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牛瘦素(LEP)酶**测试剂盒(ELISA试剂盒) Bos taurus; Bovine (Cattle) Leptin (LEP)ELISA KIT
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