试剂盒组成
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产品编号 |
规格 |
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BMSX-5 |
5 mL |
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BMSX-50 |
50 mL |
磁珠参数：
此试剂盒所用磁珠为无锡百迈格生物科技有限公司为NGS核酸片段筛选专门开发的磁珠（货号：BMS1000-2）
试剂盒储存条件及稳定性
试剂盒内组分室温保存即可，在适合的储存条件下该试剂盒未开封使用有效期为2年。
产品简介
该试剂盒采用磁珠纯化方式，适用于高通量测序文库(NGS)构建中DNA片段大小**分选和回收。DNA片段筛选试剂盒的结合缓冲液中含有超顺磁珠，根据磁珠悬浮液和样品的体积比可选择性结合DNA片段。经过磁性分离和乙醇清洗，低盐洗脱缓冲液或无核酸酶水洗脱的高纯度的DNA片段不含有核苷酸，引物，接头，酶和盐等污染物，可被直接用于下游应用，比如：酶切、测序、杂交、PCR反应等后续操作。可应用于手动或自动液体操作设备。
产品优势
1. 适合DNA的片段范围广：100 bp~50 kb；
2. 回收率高：回收率高达80%以上；
3. DNA纯度高：回收的PCR产物纯度高；
4. 操作**简单：20 min即可完成整个操作流程，无需离心；
5. 可适用于自动化、高通量PCR产物纯化。
6. 该试剂盒使用步骤和国外beckman Ampure XP高度一致，直接替换
7. 价格低，订货期短等明显优势。
产品原理
图1(核酸纯化试剂盒大致工作原理）
自备仪器和试剂
1.磁力架（建议使用百迈格生物磁力架，货号：BMB16-0.2）。
2.洗涤液：80%乙醇水溶液。
3.洗脱液：Buffer EB（10mM Tris-HCl，pH 8.0）；或者RNase-Free Water。
操作步骤
请参考Beckman Ampure XP产品，直接替换。
性能实例：
1.核酸片段筛选测试：
测试目的：通过DNA片段筛选测试自主研发试剂盒与国外进口试剂盒性能差异
1）测试平台：安捷伦2100生物分析仪
2）实验方法：将大片段DNA打断后添加磁珠纯化试剂盒进行片段筛选，运用两步法对样品进行核酸片段筛选回收（**步，1.2X。第二步，0.5X。）
图2如下：
图2，安捷伦2100生物分析仪片段选择对比测试结果：自主研发试剂盒与国际商品化品牌Ampure XP 试剂盒核酸片段回收对比（左图为Ampure XP品牌核酸纯化试剂盒安捷伦2100生物分析仪检测回收核酸平均片段大小，平均片段大小为265；右图为自主研发核酸纯化试剂盒利用安捷伦2100生物分析仪检测回收核酸平均片段大小，平均片段大小为265；）对比结果十分接近。
2. DNA回收效率测试
测试目的：检测对DNA片段的回收效率
实验方案：大片段DNA打断后，经试剂盒一步法纯化后（1.8X）测试DNA回收效率
表3如下：
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测试品牌 |
DNA总投入量 |
纯化后DNA回收效率（%） |
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Ampure XP-1 |
5ug |
84.20% |
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Ampure XP-2 |
5ug |
83.87% |
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自主研发试剂盒-1 |
5ug |
84.40% |
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自主研发试剂盒-2 |
5ug |
84.12% |
由表3可以看出，DNA回收效率测试结果相近，都达到80%以上。
3.主流测序仪测序测试
测试目的：通过市面上主流基因测序仪平台检验试剂盒稳定性
1)测试平台：Proton测序平台
2)实验步骤：生物样本提取出核酸后进行文库制备+上机测序
3)核酸样品总数12个：6个对照品，6个测试品，其中文库制备部分，分别采用本公司自主研发的纯化试剂盒和Ampure XP商品化试剂盒进行核酸纯化。
表4如下：
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Proton 平台测试结果 |
对照组（Ampure XP） |
测试组（自主研发） |
对比值 |
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**比对率 |
5.17 |
5.42 |
0.25 |
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GC含量平均值 |
41.14 |
40.85 |
- 0.29 |
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原始数据积累平均值 |
6.88 |
7.33 |
0.45 |
根据表4体现的Proton测序分析结果看，表4中的**比对率与原始数据积累平均值越高越好，GC含量平均值对照组与测试组均符合标准。经测试结果分析，自主研发核酸纯化试剂盒对比进口商品化试剂盒性能相差无异，能够有效的替代进口的磁珠纯化试剂盒。
