一、用途
莱克**属β-受体激动剂类药物，人体食入易出现毒副作用，因此许多国家都将其列为违禁药物。国家卫生部、农业部、药品监督管理局发出的公告明确禁止莱克**在食用动物中使用。 HPLC或GC-MS一直用作检测β-兴奋剂的方法，但是其前处理步骤繁琐，费用昂贵。酶联免疫检测试剂盒则可经济、**地检测尿，肌肉，肝脏及饲料中的莱克**。本试剂盒采用直接竞争酶标免疫法定量测定尿样、肝脏、水、饲料和肌肉中的莱克**。
二、测定原理
莱克**检测试剂盒是利用免疫学直接竞争法的原理，固相载体微孔板上包被有莱克**蛋白偶联物，加入待测莱克**标准品或样品溶液及莱克**的酶标记物抗体，包被在微孔板上的莱克**蛋白偶联物和标准品或样品中的莱克**竞争性地与酶标记物抗体结合，形成抗原抗体复合物；洗涤后加入显色剂，结合的酶标记物将无色的显色剂转化为蓝色的产物；加入反应终止液后使颜色由蓝色变为黄色；在450 nm波长进行检测，样品中的莱克**浓度与吸收光强度成反比。
三、试剂盒组成
（1）96孔酶标板： 1块 96T/8孔。
（2）标准品： 0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1 ppb（1mL/瓶）
（3） 酶标记物： 1瓶（7 mL）。
（4）底物缓冲液： 1瓶（7 mL）。
（5）底物液： 1瓶（7 mL）。
（6）终止液： 1瓶（7 mL）。
（7）20倍浓缩洗涤液： 1瓶（50 mL）， 加蒸馏水稀释到1000 mL 。
（2）标准品： 0 ppb、0.1 ppb、0.3 ppb、0.9 ppb、2.7 ppb、8.1 ppb（1mL/瓶）
（3） 酶标记物： 1瓶（7 mL）。
（4）底物缓冲液： 1瓶（7 mL）。
（5）底物液： 1瓶（7 mL）。
（6）终止液： 1瓶（7 mL）。
（7）20倍浓缩洗涤液： 1瓶（50 mL）， 加蒸馏水稀释到1000 mL 。
（8）使用说明书 1 份
（9）封板膜： 2 张
（9）封板膜： 2 张
（10）封口袋： 1 个
四、技术参数
灵敏度：0.1 ppb
半抑制浓度（IC50）：≤1.0 ppb
标准曲线范围：0.1-8.1 ppb
**度：板内变异误差小于10%，板间变异误差小于15%
准确性（回收率）：尿液、组织、饲料：100±20%
五、 交叉反应活性：
Analytes Cross-reactivity
Ractopamine 100.0
Ractopamine Gluc.A 1.0
Ractopamine Gluc B 5.8
Ractopamine Gluc C 387.0
(1S,3S) –Ractopamine 1.9
(1R,3S)-Ractopamine 0.9
(1S,3R)-ractopamine 98.5
(1R,3R)-ractopamine 451.7
Dobutamine 0.1
Ritodrine 2.4
Isoxsuprine 0.1
Salmeterol 0.1
Fenoterol 0.1
Clenbuterol <0.01
Salbutamol <0.01
六、样品处理
1．尿样 （稀释倍数为1）
取50 μL尿样进行实验。浑浊尿样以4000 r/min离心5分钟，取上清（清亮部分）。
2．组织 （稀释倍数为1）
2．组织 （稀释倍数为1）
a． 取2g±0.05 g组织，加入6 mL乙腈-0.1 M HCl（V乙腈：VHCl=84：16），振荡10 min,室温4000 r/min以上离心10 min。
b． 取上清3 mL，加入2 mL 0.1M NaOH，加入6 mL乙酸乙酯，振荡10 min，室温4000 r/min以上离心10 min。取全部上清于50 ℃氮气或空气吹干。
C． 加入1 mL双蒸水复溶，取50 μL进行分析。
3． 饲料（稀释倍数10）：
用研钵研碎饲料，称1 g研碎的饲料样品加入2 mL的0.01 M的PBS，涡旋5分钟。用20000 rpm离心5分钟，转移出上清液。吸取10 μL加入40 μL0.01 M的PBS中进行检测。
七、 操作步骤
1． 将试剂盒从冷藏环境中取出并将所需试剂从试剂盒取出，置室温（20-25 ℃）平衡田30 min以上, 注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2． 按需要取出微孔条及板架，将不用的微孔板重新密封，保存于2-8 ℃，不要冷冻。
3．加入50 μL样品或标准品到微孔板中，再加入50 μL酶标记物到微孔板中，充分振荡混匀，用盖板膜盖板后，室温下反应30 min（或37℃下反应20 min）。
4． 弃去孔中液体，每孔注满稀释好的浓缩稀释液，轻轻振荡，弃去孔中液体，并在吸水纸上拍干，重复6次。
5．加入50 μL底物液缓冲液，再加入50 μL底物液，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后，在室温（或37℃）暗处孵育10 min。
6．加入50 μL终止液到微孔板中，混合好在450 nm处测量吸光度值，必须在加入终止液后20 min内读取光度值。
4． 弃去孔中液体，每孔注满稀释好的浓缩稀释液，轻轻振荡，弃去孔中液体，并在吸水纸上拍干，重复6次。
5．加入50 μL底物液缓冲液，再加入50 μL底物液，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后，在室温（或37℃）暗处孵育10 min。
6．加入50 μL终止液到微孔板中，混合好在450 nm处测量吸光度值，必须在加入终止液后20 min内读取光度值。
八、 注意事项
1．使用之前将所有试剂回升至室温，使用之后立即将所有试剂放回2-8 ℃。在EIA分析中的重复性，很大程度上取决于洗板的一致性，仔细按照**的洗板顺序操作是EIA测定程序中的要点。
2．终止液为2M硫酸，避免接触皮肤。
3．不要使用过了有效日期的莱克**检测试剂盒，不同批次、不同试剂盒之间的试剂等内容不可混用，以免降低灵敏度。
4．0标准品的OD值小于0.5时，表示试剂可能变质，请勿使用。
5．显色剂变蓝，表明已变质，请勿使用。
九、储存条件
1． 2-8℃保存，切勿冷冻。
2． 将不用的酶标板放进带干燥剂的封口袋中密封保存。
3． 酶标记物和显色液对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。
